PMID：27722994

DOI：10.1007/s00705-016-3081-7

1. 小鼠感染：三嗅乙醇0.6ml麻醉动物，从小鼠眼窝后缘眼角的斜上方进针，减少对小鼠的损伤；进针深度为3mm，使用塑料管控制进针深度，保持结果均一性；缓慢推入病毒液40LD50/30μL，避免小鼠颅内高压；拔针时辅助按压手法，减少漏液。

2. 临床症状观察：病毒感染后，每天观察2次，上午、下午各1次。病毒感染时，密切观察约2小时，注意给药后30分钟内的反应。详细记录动物出异常情况、动物死亡的时间等。并对整体观察情况进行详细记录。

3. 组织病理学观察：取感染小鼠脑组织，甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察脑组织病理组织学变化，神经细胞胞质出现内基体，特殊染色和荧光染色阳性即可判定狂犬病病毒感染阳性。

1. 临床表现

动物感染后连续观察14天，正常对照组无动物发病或死亡。病毒感染组动物陆续表现出四肢瘫痪、自主运动受限等狂犬病典型症状，最终发病死亡，见图1。感染后第9天死亡2只，第10天死亡4只，第11天死亡4只。

图1 DENV感染小鼠体重变化情况及临床表现

2. 病理变化

取感染动物安乐解剖，取脑组织进行HE染色，结果发现脑干血管周围炎细胞袖套状浸润，神经细胞变性坏死，出现嗜神经细胞现象，见图2。进一步放大发现，在海马回神经细胞发现病毒包涵体，部分神经细胞核消失，发生空泡病变，见图3。使用曼氏染色和荧光染色，在动物脑组织发现明显的狂犬病毒包涵体，见图4。

图2感染动物脑组织病理照片（100x）

图3感染动物脑组织病理照片（200x）

图4. 感染动物脑组织病理照片（400x）

图5.感染动物脑干组织特染照片（400x）